上周四，赛业生物AAV基因治疗项目经理梁智铭为大家主讲「从基础到进阶 深度揭秘赛业AAV载体的创新力」线上课程，以下为本次直播常见问题汇总与解答。

FAQ:

1.视网膜下上注射能铺满整个外膜层吗？

2.在cre小鼠上注射aav为什么不能实现条件性敲除呢？

3.视网膜的几种AAV是在原来基础上改造吗？

4.如果要包装的基因超过AAV包装的限制，可以把基因序列拆分成2段，用2个AAV来包装吗？如果是用2个AVV包装要注意哪些地方？

5.包装之后的AAV靶向肝脏疾病，静脉注射是从哪个部位注射，除了尾静脉注射还有其他注射方式吗？

Q 视网膜下上注射能铺满整个外膜层吗？

眼科注射的方式，常见有玻璃体腔注射以及视网膜下注射。其中视网膜下注射一般采取AAV8，效果也不错，感染大部分外核层没太大问题，但如果想进一步提高感染效果，可以从启动子和病毒用量来考虑。

Q 在cre小鼠上注射aav为什么不能实现条件性敲除呢？

关于条件性敲除的实验思路，可以归纳为简单的一句话：flox在哪里就代表什么被敲除。既然有了cre鼠，肯定不需要打cre病毒，那flox在AAV上，自然没法完成条件性敲除。额外提醒，但可以做条件性过表达。

Q 视网膜的几种AAV是在原来基础上改造吗？

AAV2是眼科玻璃体腔注射中常用的野生血清型，赛业的眼科AI-AAV是从AAV2血清型的衣壳蛋白序列中进行氨基酸的调整，达到比7m8血清型感染能力更强穿透能力更强的新型血清型。

Q 如果要包装的基因超过AAV包装的限制，可以把基因序列拆分成2段，用2个AAV来包装吗？如果是用2个AVV包装要注意哪些地方？

可以拆分目的蛋白到2个AAV上，这也是目前科研中常用的思路，毕竟AAV包装容量默认仅有4.8kbp（含双侧ITR）左右。但使用Npu蛋白或者其他类型的连接蛋白前，建议查阅文献或者进行预实验目的蛋白的最佳分裂点从而提高完整蛋白的表达量。

Q 包装之后的AAV靶向肝脏疾病，静脉注射是从哪个部位注射，除了尾静脉注射还有其他注射方式吗？

AAV是感染肝脏的好能手。小鼠实验中，感染肝脏的注射方式常用静脉注射，其中尾静脉注射最常用并且适合P21天后的小鼠。如果是刚出生的小鼠，也可以考虑颞静脉注射。除了静脉注射以外，腹腔注射也可以达到感染肝脏的效果。