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为什么采用双gRNA打靶+电转法构建基因敲除细胞株？

基因敲除细胞株

基因敲除细胞株模型是开展基因功能研究、靶点验证及药物筛选的重要工具。但业内大部分机构利用CRISPR/Cas系统对细胞基因进行敲除均为移码突变，敲除不彻底，赛业基于传统CRISPR/Cas升级而成的CRISPR-Pro技术，可实现细胞株大片段基因敲除，采用电转方式进行转染，双gRNA同时打靶，可实现基因组片段敲除，敲除更彻底。



对比项目	双gRNA打靶+电转法	移码突变+病毒包装法
敲除是否彻底	敲除更彻底。删除大片段的碱基，可以敲除所有的转录本，一些未知的转录本也很大机会被敲除，敲除更彻底。	敲除不彻底。有些未知转录本比较靠后因此无法被敲除，这样使得未被敲除的转录本蛋白仍有表达，敲除不彻底。
删除的碱基	删除大片段的碱基	删除一个或多个碱基
鉴定难度	鉴定简单易行。PCR法即可直观鉴定有无敲除。	鉴定难度高。PCR无法进行鉴定有无敲除，必须测序鉴定才能确认。
是否需要病毒包装	不需要	需要
是否引入外源基因	不引入外源基因	引入重组慢病毒的基因组
周期	周期短，2-3个月	周期长，3-5个月
价格	便宜	贵