科研笔记｜如何做好SH-SY5Y的细胞培养与基因编辑

在实际培养过程中SH-SY5Y细胞较为敏感且增殖缓慢，难以制备单克隆，这对实验人员来说具有一定的挑战性。要确保SH-SY5Y细胞的稳定性和实验结果的可靠性，需要掌握良好的细胞培养技巧。

细胞复苏

● 取6mL完全培养基于离心管中开始复苏；

● 水浴锅融化至米粒大小冰块，终止水浴；

● 转移至离心管中离心；

● 重悬细胞后接种于合适大小的培养皿中；

● 24h后观察细胞贴壁情况并换液一次。

细胞传代

● 吸弃上清，常温PBS润洗一遍；

● 加入胰酶，使胰酶铺匀皿底；

● 消化到拍打皿时有部分细胞脱落，终止消化；

● 吹匀细胞，转移至离心管离心；

● 重悬细胞，按比例接种。

细胞冻存

● 消化、离心，获得细胞沉淀；

● 加入冻存液重悬细胞，转移至冻存管中；

● 冻存管放入4℃预冷的程序性冻存盒，再放入-80℃冰箱过夜；

● 第二天转移至液氮保存。

● 细胞传代时比例不宜太高，培养密度不宜太低，一般1:2或1:3传代较为合适，培养密度越低增殖速度越慢；

● 细胞生长过多时会堆在一起并逐渐脱落，需要在脱落前及时传代；

● 一些细胞团在传代时需要吹散，吹打力度需适中；

● 细胞密度越高，培养基消耗越快，注意及时换液或传代。

SH-SY5Y细胞系的基因修饰包括基因敲除、点突变、KI、过表达和干扰等，赛业生物通过优化的SH-SY5Y单克隆制备条件，实现SH-SY5Y基因编辑单克隆交付，可显著提高实验的准确性和可靠性，为神经科学研究提供更坚实的基础。

基因敲除

基于Smart-CRISPR™细胞基因编辑系统，赛业生物可提供SH-SY5Y的KO细胞定制服务，交付单克隆纯合子。我们使用优化的转染体系将RNP直接递送到细胞内，gRNA切割效率高达90%以上，相比于质粒和病毒等CRISPR/Cas介导的方法，切割效率提升明显，脱靶效率明显降低，能更精准地切割目标DNA序列。

点突变

基于Smart-CRISPR™细胞基因编辑系统，我们可提供精准、高效的SH-SY5Y定点突变和KI细胞定制服务。通过优化的α-donor体系将人源化的Cas蛋白、gRNA和donor三组分转染至目的细胞，产生高效同源重组，HDR高达49%，实现单克隆纯合子交付。

稳转株

赛业生物优化升级了转染载体系统，凭借多年细胞生物学经验，建立了一套成熟稳定的基因过表达实验体系，能提供SH-SY5Y稳定表达外源基因或RNA干扰元件的稳定Cell Pool或单克隆细胞株，可获得蛋白高表达10倍以上。

● 细胞转染前确保状态良好，细胞密度70%左右，镜下观察细胞团不宜太多；

● 消化时尽量吹散成单个细胞；

● 极限稀释法制备单克隆，使用赛业定制条件培养基，并额外添加10%的血清和适量细胞因子，当观察到有克隆长出后补充新鲜培养基继续培养；

● 由于该细胞汇合度低时增殖速度慢，所以单克隆扩增建议先从96孔板转到24孔板，再到12孔板、6孔板，不要一次性转入较大的皿中扩增。