新品上架丨靶向成纤维细胞的Col1a2-iCre小鼠（附赠工具鼠取材验证重组效率的解决方案）

COL1A2基因编码I型胶原蛋白的pro-α2(I)链。I型胶原蛋白是人体内含量最多的胶原蛋白，主要在成纤维细胞中表达。成纤维细胞是存在于全身结缔组织中的细胞，包括皮肤、肌腱、韧带和骨骼，因此I型胶原蛋白在为这些组织提供抗拉强度和结构支撑方面起着至关重要的作用，并且参与许多生物学过程，如细胞迁移、细胞黏附和细胞信号传导等。

赛业生物利用基因编辑技术自主研发构建了Col1a2-iCre小鼠（产品编号：C001528），该模型在小鼠Col1a2基因调控元件的驱动下表达密码子优化后的Cre重组酶（iCre）。iCre重组酶表达模式与内源基因相似，且内源性Col1a2基因表达不受影响。当Col1a2-iCre小鼠与含有loxP位点的小鼠杂交后，子代小鼠可在成纤维细胞中引发由Cre重组酶介导的loxP位点间的序列重组。

图1 皮肤、心脏和肺部组织中tdTomato蛋白表达的免疫荧光（IF）检测

将Col1a2-iCre小鼠与条件性表达tdTomato荧光蛋白的Rosa26-LSL-tdTomato小鼠交配，采集子代小鼠的各组织并通过免疫荧光（IF）检测确定Cre重组酶的表达。结果显示在Cre+小鼠的皮肤、心脏和肺部组织中检测到红色荧光信号。

在Col1a2-iCre小鼠（产品编号：C001528）中，根据组织学形态结构分析，推测皮肤真皮层、心肌细胞之间、心脏瓣膜及心内膜、肺支气管、肺泡中发生Cre重组的细胞主要为成纤维细胞。因此，Col1a2-iCre小鼠可用于靶向成纤维细胞的组织特异性研究。

工具鼠模型推荐

答：当验证Cre工具鼠在特定组织或细胞中的重组效率时，我们常常使用Cre工具鼠与报告小鼠（如Rosa26-LoxP-Stop-LoxP-tdTomato或EGFP）交配，以观察子代中目标组织或细胞的荧光表达情况。然而，对于一些难以获取的组织或细胞，确认荧光表达可能会变得困难。在这种情况下，可以采用以下几种方法来解决问题：

1. 细胞分选：

流式细胞术或者磁珠分选可以高效地分离和分析特定荧光标记的细胞群体，如果目标细胞可以从组织中分离出来，使用流式细胞术可以来检测细胞中的荧光表达情况，适用于CD系列细胞等。

举例：将Cd19-Cre小鼠（产品编号：I001184）与条件性表达tdTomato荧光蛋白的Rosa26-LSL-tdTomato小鼠交配，产生双基因杂合子代小鼠。采集双基因杂合子代小鼠的外周血、脾脏和骨髓组织并通过流式细胞术分析tdTomato蛋白的分布，最终可确定Cre重组酶在B细胞中的高表达。

2. 细胞标记物：

细胞标记物抗体可以用于识别不同类型的细胞，通过细胞标记物和荧光的共定位能够精确定位和定量分析特定细胞中的Cre介导的重组情况，适用于已有商业化细胞标记物的免疫细胞、神经细胞、上皮细胞、内皮细胞、癌症标记等。

举例：Cx3cr1-iCre小鼠（产品编号：C001391）与条件性表达tdTomato荧光蛋白的Rosa26-LSL-tdTomato小鼠交配，产生双基因杂合子代小鼠。采集双基因杂合子代小鼠的脑、皮肤、肝、肾、肠、脾和肺组织等组织，使用小胶质细胞标记物IBA1抗体和Tomato红色荧光抗体共定位，最终可确认Cre重组酶主要定位于脑组织小胶质细胞中。

3. 组织学形态结构分析：

在免疫荧光实验中，有时需要根据组织学形态结构来判断目标细胞的荧光信号。例如，在复杂的组织样本中，细胞类型多样且分布复杂，通过观察组织学形态可以更准确地识别特定类型的细胞。此外，在进行多种抗体同时标记时，不同的荧光信号可能会重叠或相互干扰，或者在抗体特异性不够高导致背景染色较强的情况下，结合组织学形态可以帮助更好地判断荧光信号的来源。这种方法在实验条件不理想时尤为重要，有助于提高实验结果的准确性和可靠性。

举例：本期介绍的Col1a2-iCre小鼠（产品编号：C001528）因为荧光抗体与细胞标记抗体双染效果不佳，则选择组织学形态结构分析，最终确认皮肤真皮层、心肌细胞之间、心脏瓣膜及心内膜、肺支气管、肺泡发生Cre重组的细胞主要为成纤维细胞。

4. 体外培养细胞

某些细胞类型由于其特殊的生物学特性，无法通过流式细胞术等技术分选出来。这些细胞通常需要在体外培养条件下维持其特性和功能，以便进行后续的实验处理和分析。例如干细胞、特定分化状态的细胞等。

以上介绍的方法不是仅固定适用于某一组织或细胞类型，可以联合应用从多个角度综合判定Cre重组酶的表达位置，提高实验结果的可靠性和准确性。