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CAR-T细胞体外功能怎么验证？指标有哪些?

终于终于构建好CAR-T细胞了，芜湖！

可别得意的这么早，功能还没有验证，万里长征可不能倒在最后几步。

那应该要检测什么呢？怎么检测呢？怎么算好怎么算……

等等等一下！容我翻一下我的笔记再来回答你

在从事CAR-T细胞治疗研发的路上，小赛也在打磨自己的「医药养成笔记」，把遇到过的问题都认真整理出来。同时，小赛也准备了「细胞治疗完整解决方案」，包括了CAR分子的设计、慢病毒包装、CAR-T细胞构建、体外体内杀伤验证等多个重要环节，致力于为广大研发人员的项目出谋划策。点击下方链接即可免费领取电子版，快来获取干货吧！

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「医药养成笔记」精选放送

Q1:CAR-T细胞构建后在进行功能验证实验前一般都进行哪些指标的检测？

Answer:一般检测指标包括T细胞纯度（CD3单阳性细胞占比）、CD4+和CD8+T细胞占比、CAR分子阳性率；另外额外的指标还包括活化指标（CD25、CD69等）、耗竭指标（PD-1、TIM-3、LAG-3等）；免疫分型（Tcm、Tem、Tscm等）。

马叔请回答系列

Q2:评价CAR-T/NK细胞功能的关键指标有哪些？

Answer:体外实验中主要评价指标包括：杀伤特异性、肿瘤细胞裂解能力、细胞因子分泌能力、抗原刺激下的增殖能力等等。

马叔请回答系列

Q3:CAR-T/NK细胞的杀伤特异性一般都怎么验证？

Answer:一般情况下我们可以通过选择合适的肿瘤细胞和设置严格的对照来实现对CAR-T细胞的特异性验证。例如一个实验中，我们选择CAR-T和Mock-T细胞作为效应细胞，选择一株抗原阳性细胞和一株抗原阴性细胞作为靶细胞，分别用CAR-T和Mock-T细胞对两株肿瘤细胞进行杀伤，如果CAR-T细胞特异性良好，结果我们会看到：CAR-T细胞对抗原阳性肿瘤细胞有良好的杀伤作用，但对抗原阴性的肿瘤细胞并无明显增强杀伤作用；Mock-T细胞对抗原阳性和阴性肿瘤细胞均无明显的杀伤作用。

马叔请回答系列

Q4:CAR-T细胞杀伤肿瘤的持久性怎么验证？

Answer:CAR-T细胞功能的持久性我们可以通过肿瘤细胞重复刺激实验来验证，就是定点加入肿瘤细胞，观察CAR-T细胞对肿瘤细胞的清除能力。

马叔请回答系列

Q5:如何从多个CAR分子构建的CAR-T细胞中筛选出抗肿瘤活性最好的CAR-T细胞？

Answer:关于CAR分子的功能评价和筛选有多个维度，其中主要包括：抗肿瘤活性和细胞因子分泌两个指标。对于如何快速筛选出功能较好的CAR分子，目前有两种方法可以借鉴。一种就是基于工具细胞Jurkat，构建CAR-Jurkat荧光报告细胞，检测不同CAR分子介导的Jurkat细胞活化效应。另一种是使用不同CAR分子构建CAR-T细胞，逐个评价对比不同CAR-T细胞的功能。