B6-hCD3小鼠 | 靶点人源化模型 | 药物筛选评价小鼠模型

产品编号：C001325

品系全称：C57BL/6NCya-Cd3^tm2(hCD3)/Cya

品系背景：C57BL/6NCya

传代建议：纯合与纯合互配

品系描述

分化簇3（CD3）是一种蛋白质复合物，它是T细胞的共同受体，参与细胞毒性T细胞（CTL）和辅助型T细胞（TH）的激活。CD3由五种肽链组成，即γ链、δ链、ε链、ζ链和η链，这些链都是跨膜蛋白。CD3分子的跨膜区通过盐桥与TCR的两条肽链的跨膜区连接，形成TCR-CD3复合体，共同参与T细胞对抗原的识别^[1-2]。TCR识别抗原后，活化信号由CD3转导至T细胞内。在T细胞的所有发育阶段，CD3都具有高度特异性，因此被视为T细胞特异性的免疫组织化学标记物。此外，CD3存在于几乎所有的T细胞淋巴瘤和白血病中，可用于区分表面相似的B细胞和骨髓肿瘤。由于CD3在T细胞激活和抗原识别中起着重要作用，它正在成为Ⅰ型糖尿病和其他自身免疫性疾病免疫抑制疗法中的重要药物靶点^[3]。

本品系是通过胚胎干细胞（ES）靶向技术，将小鼠的CD3编码基因原位替换为人的CD3基因，从而获得的CD3人源化模型。本模型可用于研究T细胞的激活和抗原识别机制，以及在自身免疫性疾病的免疫抑制疗法中，用于CD3靶向药物的开发、验证和评价。

构建方式

通过胚胎干细胞（ES）靶向技术将小鼠CD3复合物的三个成分，即Cd3ε、Cd3δ和Cd3γ，替换为对应的人类同源基因CD3E、CD3D和CD3G。

研究应用

免疫系统研究；
T细胞激活和抗原识别研究；
自身免疫性疾病免疫抑制疗法研究；
CD3靶向药物开发及评价研究。

验证数据

人源CD3和小鼠CD3表达检测

图1. 人源CD3（hCD3）和小鼠CD3（mCD3）表达的流式细胞术检测。检测结果显示，纯合B6-hCD3小鼠外周血和脾脏中均可检测到人源CD3E+细胞，且几乎不存在鼠源CD3E表达，而在野生型小鼠（WT）中只有鼠源CD3E表达。

T细胞及亚群比例检测

图2. T细胞及亚群（CD4+&CD8+）表达的流式细胞术检测。纯合B6-hCD3小鼠外周血和脾脏中CD3+ T细胞及其亚群CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的比例与野生型小鼠（WT）中的比例基本一致。

体外PBMC肿瘤杀伤效果

图3. B6-hCD3小鼠来源的PBMC（B6-hCD3）和人PBMC（hPBMC）的体外杀伤效果对比。采集小鼠外周血单个核细胞（PBMC），将人PBMC和B6-hCD3小鼠来源的PBMC分别与人多发性骨髓瘤细胞（MM1R）进行体外孵育，在不同时间点检测对肿瘤细胞的杀伤效果。结果显示B6-hCD3小鼠来源的PBMC在体外对人源肿瘤细胞的杀伤效果与人PBMC相当。此外，内部检测数据显示，与市场同类模型相比，此款B6-hCD3小鼠的PBMC具有更好的杀伤效果（数据未展示）。

效应细胞（E）：PBMC；靶细胞（T）：MM1R；E:T=1 : 1=2*10⁴: 2*10⁴；时间：24h/48h；抗体：1nM BiTE。

表型总结

B6-hCD3小鼠成功表达人源CD3，且B6-hCD3纯合小鼠不再表达鼠源CD3，只表达人源CD3。B6-hCD3纯合小鼠体内T细胞及其亚群CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的比例与野生型基本一致，表明人源CD3的表达不会影响小鼠体内T细胞的组成。此外，PBMC杀伤实验结果显示，B6-hCD3小鼠的PMBC具有和人PBMC相似的人源肿瘤体外杀伤效果，表明其具有和人类PBMC相似的功能。

参考文献

[1]Dong D, Zheng L, Lin J, Zhang B, Zhu Y, Li N, Xie S, Wang Y, Gao N, Huang Z. Structural basis of assembly of the human T cell receptor-CD3 complex. Nature. 2019 Sep;573(7775):546-552.

[2]Dykhuizen M, Ceman J, Mitchen J, Zayas M, MacDougall A, Helgeland J, Rakasz E, Pauza CD. Importance of the CD3 marker for evaluating changes in rhesus macaque CD4/CD8 T-cell ratios. Cytometry. 2000 May 1;40(1):69-75.

[3]Bolt S, Routledge E, Lloyd I, Chatenoud L, Pope H, Gorman SD, Clark M, Waldmann H. The generation of a humanized, non-mitogenic CD3 monoclonal antibody which retains in vitro immunosuppressive properties. Eur J Immunol. 1993 Feb;23(2):403-11.